رسالة ماجستير في كلية التربية للعلوم الصرفة عن التوصيف الجزيئي واستخلاص السكر المتعدد الخارج خلوي من عزلة محلية لبكتريا Pseudomonase savastanoi Pv.savastanoi ودراسة التعبير الجيني للجينات المشفرة لهرمون اندول حامض الخليك IAAوتقييم فعاليته البايولوجية.

ناقشت كلية التربية للعلوم الصرفة بجامعة الموصل رسالة ماجستير عن التوصيف الجزيئي واستخلاص السكر المتعدد الخارج خلوي من عزلة محلية لبكتريا Pseudomonase savastanoi Pv.savastanoi ودراسة التعبير الجيني للجينات المشفرة لهرمون اندول حامض الخليك IAAوتقييم فعاليته البايولوجية ،

 اليوم الاثنين الثالث من كانون الثاني 2022، حضر جانبا منها السيد عميد الكلية الأستاذ المساعد الدكتور قيس إسماعيل إبراهيم المحترم والسيد المعاون الإداري المحترم والسيد رئيس قسم علوم الحياة وعدد من تدريسيي الكلية.

تضمنت الرسالة التي تقدمت بها الطالبة ريم علي احمد في قسم علوم الحياة عدة محاور، المحور الأول: اختص بعزل بكتريا   Pseudomonas savastanoi   من أورام الزيتون Olea Europa العائدة لمواقع مختلفة من مدينة الموصل، وشملت مناطق (الفاضلية، الرشيدية، بستنة نينوى، بعشيقة، الكبة، حاوي الكنيسة، حي العربي) ،وشخصت العزلات اعتمادا على الصفات المظهرية والزرعية والاختبارات الكيموحيوية والأمراضية. وجاءت نتائج التشخيص الجزيئي بتضخيم الـحمض النووي DNA باستعمال تقانة التفاعل التضاعفي المتعدد التداخل Nested Multiplex PCRوباستعمال بادئات متخصصة لتؤكد عائدتيها إلى جنس Pseudomonas نوع savastanoi، حيث لوحظ انفصال حزما منفردة أومزدوجة متالقة ذات دقة واضحة عند الحجم الجزيئي (338) زوج قاعدي و(454)زوج قاعدي  بالمقارنة مع سلم  الواسمات الجزيئي  في كل عزلة من العزلات  العائدة لبكتريا Pseudomonas savastanoi.

ومن خلال بناء شجرة التقارب الوراثي للعزلات  المشخصة مع عزلات  مرجعية  تابعة لنفس الجنس والنوع تبين أنها تقع ضمن  نفس العنقود  وبنسبة تطابق  (100) % وفق  برنامج DNA  Blast .

المحور الثاني: من هذه الدراسة، اهتم بعزل السكر المتعدد الخارجي EPS من العزلات أعلاه، وتم انتخاب سبع عزلات من Pseudomonas savastanoi وهي: (Pss1، Pss2، Pss3، Pss4، Pss5، Pss6، Pss7)  بوصفها أفضل عزلات  منتجة للسكريات المتعددة  الخارجية  بناء على المظهر الخارجي للمستعمرات  ونموها  اللزج  على الوسط  الصلب، وأظهرت نتائج الغربلة  الثانوية  أن أفضل عزلة من بين العزلات السبع كانت (Pss3) Pseudomonas savastanoi حيث أعطت  أفضل إنتاج للسكر المتعدد الخارجي  والذي بلغ 3))غم/لتر على الوسط King M وبعد ثلاثة أيام  من التحضين.

المحور الثالث: فتضمن تنقية وتوصيف السكر المتعدد الخارجي المعزول من البكتريا، إذا تم الكشف عن تركيب السكر المنتج والمستخلص من البكتريا باستعمال تقنية الـ TLC، HPLC  وأظهرت  النتائج أن الوحدات الأساسية التي يتكون منها السكر هي الكلوكوز، الفركتوز، المانوز، وهذا ما أكدته نتائج التشخيص بتقنية الـ HPlC  ، كما تم التأكد من كون  المركبات  المستخلصة ذات طبيعة كاربوهيدراتية، وذلك بدلالة امتصاصية المادة الفعالة عند الطول  الموجي 3421.72 سم1- والمتمثلة بمجموعة  الهيدروكسيل Hydroxyl  OH-))  والكاربونيل carbonyl() عند الطول الموجي  173.08 سم1-  على التعاقب   وأن محتوى الرماد للـ EPS المنتج كان  3.4))%، كما أظهرت نتائج التشخيص  خلو السكر المنتج  من النشا.         

المحور الرابع: فقد تناول تقييم  الفعالية البايولوجية  للسكر  المتعدد الخارجي  المنتج من العزلة  المنتخبة، وأظهرت النتائج التأثير  التثبيطي للـ EPS   على بعض  عزلات  البكتريا  المسسببة  لللأمراض، وأظهرت  النتائج فعاليته المضادة ضد  البكتريا  وفعاليته المضادة للأكسدة  من خلال  قدرة وتأثير الـ EPS  المنتج  على كبح  الجذور الحرة، واثبات نجاحه  في  تكوين  المستحلبات مع مختلف الزيوت  النباتية  والتي تعد أمرا واعدا في إمكانية  استعماله في مختلف  الصناعات الغذائية كصناعة الألبان والأجبان وغيرها.             

أما المحور الأخر: فقد تناول  دراسة تأثير الأمواج  فوق السمعية  ذات التردد 47.6 كيلو هرتز ولمدد زمنية  متابينة (90، 60، 30، 15، 5) ثانية، حيث أظهرت النتائج أن أعلى معدل في عدد المستعمرات كان قد سجل  عند المعاملة (60) ثانية وبلغ 57))  مستعمرة  وبكثافة ضوئية Optical density وصلت 2.8))، ثم دراسة تأثير هذا  العامل  الفيزيائي في التعبير الجيني  للجينات  المشفرة لهرمون إندول حامض الخليك IAA باعتماد تقانة التضخيم  الكمي اللحظي                          (PCR q RT-)، حيث أظهرت  نتائج التعبير الجيني للمورثين  PSN و PSV قيد الدراسة، وجود فروقات واضحة في مستويات التعبير الجيني في عزلات المعاملة ومعاملة السيطرة، إذ بينت النتائج انخفاض التعبير الجيني (Down regulation) للمورث PSV في العينة    Pss4(T)عند التعرض للأمواج فوق السمعية بالجرعة (47.6/60) KHZ/Sec والتي  بلغت نسبة التعبير الجيني  فيها (1.950)، بينما سجلت أعلى تعبير جيني(Up regulation) للمورث ذاته والواقع تحت نفس تأثير المعاملة في العزلةpss2(T) وبلغ (2.211)، وكذلك الحال للمورث PSN للعزلات المعرضة للتأثير ذاته كان قد سجل في العزلة  Pss4(T) والبالغ (2.959)، وأدنى تعبير جيني له سجل في العزلة Pss3(T) وبلغ 1.054)).كما أشارت نتائج التعبير الجيني للمورث  PSN التابع للعزلات الى تباين في مستوى التعبير الجيني للعزلات ،إذ كان الأعلى(تنظيم مرتفع Up regulation) في العزلة  Pss2 وبلغ (1.467095)، بينما

كانت العزلة PSS6 الأدنى تعبيرا للجين (Down regulation ) بين العزلات، كما بينت النتائج أن العزله الأعلى تعبيرا للجين PSV   كان قد سجل في العزلة PSS4 وبلغ (2.4066) والعزله PSS3 الأدنى تعبيرا للجين بين العزلات قيد الدراسة.

تراس لجنة المناقشة الأستاذ المساعد الدكتور ضياء عبدالحي يونس من الجامعة التقنية الشمالية/المعهد التقني الموصل وعضوية كل من الأستاذ المساعد الدكتورة نجوى ابراهيم خليل والأستاذ المساعد الدكتور هفال محمد خالد من جامعة زاخو/كلية العلوم، وبإشراف وعضوية المدرس الدكتورة رغد نواف جرجيس.

وتم قبول رسالة الماجستير فالف مبروك للطالبة والمشرف والكلية على هذا الإنجاز العلمي.

 

 

 

اقرأ ايضاً